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如何選購合適的PCR耗材

如何選購合適的PCR耗材PCR耗材包括PCR管(EP管）、8連排管、96孔PCR板、深孔板等這些材質(zhì)一般為聚丙烯PP材質(zhì)，具有高品質(zhì)、高純度、高透明的特點(diǎn)，一般都在潔凈空間生產(chǎn)加工。PCR耗材為什么一般都是PP材質(zhì)的呢，為什么需要環(huán)境潔凈？因?yàn)镻CR/qPCR耗材通常會與試劑或樣品直接接觸，而聚丙烯（PP）材質(zhì)是生物學(xué)惰性材料，表面不易于粘附生物分子，且有著良好的化學(xué)耐性，及溫度耐受性（可以121℃高壓滅菌，也可以承受熱循環(huán)過程中的溫度變化）。這里強(qiáng)調(diào)一下耗材質(zhì)量（是否干凈）...

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實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)中常見問題匯總

實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)中常見問題匯總實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)（real-timePCR）也叫qPCR（QuantitavePCR），是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號累積實(shí)時(shí)監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過特定數(shù)學(xué)原理對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。它是一項(xiàng)臨床上非常成熟的技術(shù)，目前在分子生物學(xué)領(lǐng)域，qPCR核酸定量的主要方法。目前仍在全球肆虐的病毒鑒定的“金標(biāo)準(zhǔn)”——核酸檢測就是通過qPCR原理進(jìn)行的。那么拿到一個樣本，需要經(jīng)過以下多項(xiàng)操作流程才能定量檢測到它的核酸含量。其中...

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使用生物反應(yīng)器研究乳腺癌亞型細(xì)胞外囊泡產(chǎn)生技術(shù)

使用生物反應(yīng)器研究乳腺癌亞型細(xì)胞外囊泡產(chǎn)生技術(shù)使用傳統(tǒng)體外方法生產(chǎn)的EV的深入表征和驗(yàn)證由于需要大面積的細(xì)胞單層和大量的培養(yǎng)基，培養(yǎng)可能具有挑戰(zhàn)性。該實(shí)驗(yàn)方法使用貼壁細(xì)胞生物反應(yīng)器系統(tǒng)以節(jié)省空間、資源和時(shí)間的方式同時(shí)培養(yǎng)多種不同亞型的乳腺癌細(xì)胞系，從而能夠持續(xù)生產(chǎn)大量用于下游實(shí)驗(yàn)的EV。一、生物反應(yīng)器接種、適應(yīng)和維護(hù)培養(yǎng)基A：含有10%胎牛血清（FBS，Merck）和1%青霉素/鏈霉素（PS，Gibco）的DMEM（Gibco）。培養(yǎng)基B：AdvancedDMEM/F-12(...

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細(xì)胞培養(yǎng)常見問題匯總

細(xì)胞培養(yǎng)常見問題匯總1冷凍管應(yīng)如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入37C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí)，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂。2細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí)，是否應(yīng)馬上去除DMSO？除少數(shù)特別注明對DMSO敏感之細(xì)胞外，絕大部分細(xì)胞株（包括懸浮性細(xì)胞），在解凍之后，應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后...

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層析工藝放大需要遵循的原則

層析工藝放大原則包括線性放大原則和固定保留時(shí)間原則。線性放大原則線性放大原則是工藝放大過程中常用的原則，其核心思路是保持層析柱柱高和線性流速不變，只放大層析柱直徑和體積流速。固定的柱高和線性流速理論上可以保證相同的保留時(shí)間、層析中溶液用到的CV數(shù)和洗脫樣品CV數(shù)，較大程度保證相同的純化效果。線性放大原則的具體操作方法可參見下表：層析工藝在實(shí)際的應(yīng)用過程中，線性放大可能會遇到幾個問題，一是層析設(shè)備供應(yīng)商提供的層析柱都是幾個固定規(guī)格，可能無法適配具體某項(xiàng)的工藝需求；二是當(dāng)層析柱直...

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