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技術文章
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2023-329
hTERT成纖維細胞為永生化子宮內膜成纖維細胞(THESC)具有延長的壽命，并且在核型、形態和表型方面與原代親代細胞相似。在功能上，THESCs顯示激素治療后蛻膜化的生化終點。THESCs來源于從患有肌瘤的成年女性身上獲得的基質細胞。原代基質子宮內膜細胞通過用來自包裝細胞系pA317-hTERT的上清液感染而永生化，該細胞系表達hTERT和嘌呤霉素抗性基因。hTERT成纖維細胞培養方案如下：一、所需材料Dulbecco改良Eagle培養基(DMEM)/F12(Sigma,D2...
查看更多2023-329
在細胞上做基因研究的一般的過程就是：利用CRISPR-Cas9先做基因除(GeneKnockout)，獲得基因敲除細胞系純合細胞：然后分析相關的生物學表型；最后做為對照還需要將原敲除的基因回補會到原細胞系中，做為對照細胞進行實驗對比。而利用Cas9進行細胞敲除之后，細胞回補實驗室要注意哪些問題?特別需要考慮的技術原理是那些？如何規劃好實驗流程，下面我們就一步步的進一下細胞其因敲除和回補實驗的效率/價格/周期等。一、敲除細胞的方式一般都是純合基因敲除細胞，當然也可以選擇MixC...
查看更多2023-328
細胞培養基pH值對細胞的影響培養基是用來供給細胞營養，促使細胞增殖的，也是細胞賴以生長的環境。細胞培養實驗中用量最多的就是細胞培養基，雖然細胞培養試驗基本技術大同小異，但是每種細胞的培養條件卻相差甚遠。若偏離某種細胞所需的培養條件，則會導致細胞表達不同的表型。一、培養基體系主要成分及功能介紹1、葡萄糖：用于細胞能量代謝。2、CO?：細胞需要少量的二氧化碳來維持生長。在培養基中，溶解的CO?與碳酸氫鹽離子處于平衡狀態，許多培養基利用了這種CO?/碳酸氫鹽反應來緩沖培養基的pH值...
查看更多2023-327
各種微生物由于遺傳特性不同，因此適合采用的保藏方法也不一樣。一種良好的有效保藏方法，首先應能保持原菌種的優良性狀長期不變，同時還須考慮方法的通用性、操作的簡便性和設備的普及性。下面介紹幾種常用的菌種保藏方法：1.斜面低溫保藏法將菌種接種在適宜的斜面培養基上，待菌種生長完成后，置于4℃左右的冰箱中保藏，每隔一定時間（保藏期）再轉接至新的斜面培養基上，生長后繼續保藏，如此連續不斷。此法廣泛適用于細菌、放線菌、酵母菌和霉菌等大多數微生物菌種的短期保藏及不宜用冷凍干燥保藏的菌種。放線...
查看更多2023-38
培養基作為細胞的“食物”，是細胞培養和發酵的基礎，大腸桿菌在不同的培養基中培養可能會表現出不同的性狀，而利用這些性狀的不同，可將部分菌種進行區分或分離，此外，根據目標菌種選擇合適的培養基可以低成本、穩定的高表達。大腸桿菌分離培養基常見的主要有以下幾種：大腸桿菌分離培養基：主要根據不同的大腸桿菌在培養基中的生產速度，代謝產物，對培養基中特定組分的需求利用情況不同等實現對不同種類的菌種進行分離或篩選。LB固體培養基：是一種主要組分為酵母提取物、胰化蛋白胨、NaCl瓊脂的非選擇性固...
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